人 IgE 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）應(yīng)用方法

更新時間：2026-02-24

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僅供科研使用，不得用于診斷

人IgE檢測試劑盒

（酶聯(lián)免疫法）

貨號：RJ13428

線性范圍：32-2000 ng/mL

1. 預(yù)期用途

本試劑盒用于檢測血清、血漿等樣本中人IgE濃度，僅供研究使用。

2. 檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法原理：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及校準(zhǔn)品中待測物，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的酶標(biāo)二抗，結(jié)合形成“抗體-抗原-抗體-HRP"免疫復(fù)合物，加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍(lán)色，加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中待測物的濃度。

3. 包含的實驗材料實驗材料

名稱 Label	組成成分 Kit Components	數(shù)量（48T） Quantity	數(shù)量（96T） Quantity
酶標(biāo)板	預(yù)包被捕獲抗體的酶標(biāo)板	8×6條	8×12條
校準(zhǔn)品（10×）	待測物（20000ng/mL）	1支×100μL	1支×200μL
酶標(biāo)抗體（100×）	100倍濃縮HRP酶標(biāo)記的檢測抗體	1支×50μL	1支×100μL
通用稀釋液（20×）	樣品/校準(zhǔn)品通用稀釋液	1支×10mL	1支×15mL
濃縮洗液（20×）	20倍濃縮洗液	1支×15mL	1支×25mL
顯色劑	TMB	1支×6mL	1支×10mL
終止液	稀硫酸	1支×3mL	1支×6mL

如需單獨采購通用型組分，請?zhí)峁?yīng)的組分名稱。

4. 需要但未包含的實驗材料

· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；

· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；

· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；

· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；

· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機(jī)、旋渦振蕩器等輔助設(shè)備；

· 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。

5. 試劑的準(zhǔn)備及儲存

· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。

1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。

1×酶標(biāo)記物工作液的配制：100×酶標(biāo)抗體用“1×通用稀釋液"按1:100倍稀釋，例如：10uL的（100×）酶標(biāo)抗體加入990uL的“1×通用稀釋液"，混合均勻。配制好的1×酶標(biāo)抗體工作液可以在2~8℃保存8h。

· 工作校準(zhǔn)品的配制：校準(zhǔn)品開封前應(yīng)離心30秒，確保所有校準(zhǔn)品集中于底部；

準(zhǔn)備7個離心管，將10×校準(zhǔn)品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液"稀釋10倍配制成校準(zhǔn)品S1。例：50uL的10×校準(zhǔn)品+450uL的“1×通用稀釋液"，制備得到500μL的S1濃度校準(zhǔn)品。在隨后的6個離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液"，在這6個試管中（S2~S7）將S1校準(zhǔn)品依次倍比稀釋6個梯度至S7，共配制7個濃度的校準(zhǔn)品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下圖所示。“1×通用稀釋液"作為空白校準(zhǔn)品S0。

6. 樣品采集、預(yù)處理及儲存

· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細(xì)胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應(yīng)及時進(jìn)行檢測，如不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，樣品凍融不超過2次。

· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應(yīng)及時進(jìn)行檢測，如不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，樣品凍融不超過2次。

· 組織：組織稱重后剪碎，將剪碎的組織加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量體積比，比如100mg的組織樣品對應(yīng)400uL的裂解液，具體可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

· 細(xì)胞：取適量細(xì)胞，于冰上進(jìn)行超聲破碎，5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

· 細(xì)胞上清：取細(xì)胞上清于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

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7. 實驗步驟

使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。

注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。

1	編號	檢測試驗需設(shè)置校準(zhǔn)品孔、樣品孔、空白孔，合理規(guī)劃各樣本的排布。
2	稀釋加樣	校準(zhǔn)品孔：每孔加入校準(zhǔn)品100uL，（S1-S7，共7個濃度）。樣品孔：每孔加入1×通用稀釋液50uL，再加入樣品50uL。* 空白孔：每孔加入1×通用稀釋液100uL。
3	溫育	蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘
4	洗板	洗板3次，最后一次洗板后倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍去殘液。
5	加酶	校準(zhǔn)品孔/樣品孔：每孔加入100μL酶標(biāo)抗體工作液。空白孔：不加酶工作液。
6	溫育	蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。
7	洗板	洗板5次，最后一次洗板后倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍去殘液。
8	顯色	每孔加入顯色劑100uL，37℃避光顯色15分鐘。
9	終止	每孔加終止液 50uL。
10	測定	使用酶標(biāo)儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進(jìn)行檢測。