更新時間：2026-01-21 
瀏覽次數(shù)：113線性范圍：0.62-40 ng/mL
1. 預期用途
本試劑盒設計用于定量檢測血清、血漿、組織勻漿、細胞上清、細胞裂解物等樣本中的待測物濃度，僅供研究使用，不得用于醫(yī)學診斷。
2. 檢測原理
試劑盒采用競爭法原理：將合成半抗原包被于酶標板上，同時加入樣品和抗體試劑（一抗），樣品中的待測物與半抗原上偶聯(lián)的待測物競爭結合抗體（一抗），結合形成“半抗原-抗體"免疫復合物，清洗去除游離的免疫復合物后，加入TMB顯色，樣本中待測物濃度越高藍色越淺，加入終止液，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈反比，通過繪制標準曲線計算出樣本中待測物的濃度。
3. 包含的實驗材料實驗材料
名 稱 Label | 組成成分 Kit Components | 數(shù)量（48T） Quantity | 數(shù)量（96T） Quantity |
酶標板 | 預包被半抗原的酶標板 | 8×6條 | 8×12條 |
校準品（10×） | 10倍濃縮校準品（400 ng/mL） | 1支×200μL | 1支×300μL |
一抗抗體 | 即用型檢測抗體 | 1支×3mL | 1支×6mL |
酶標二抗 | HRP標記二抗抗體 | 1瓶×6mL | 1瓶×12mL |
通用稀釋液（20×） | 樣品/校準品/一抗抗體通用稀釋液 | 1支×10mL | 1支×15mL |
濃縮洗液（20×） | 20倍濃縮洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
顯色劑 | TMB、過氧化氫 | 1支×6mL | 1支×10mL |
終止液 | 稀硫酸 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需單獨采購通用型組分，請?zhí)峁?/span>組分名稱。
4. 需要但未包含的實驗材料
· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；
· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；
· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機、旋渦振蕩器等輔助設備；
· 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標儀、洗板機。
5. 試劑的準備及儲存
· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
· 1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
· 工作校準品的配制：校準品開封前應離心30秒，確保所有校準品集中于底部；
準備7個離心管，將10×校準品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液"稀釋10倍配制成校準品S1。例：50uL的10×校準品+450uL的“1×通用稀釋液"，制備得到500μL的S1濃度校準品。在隨后的6個離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液"，在這6個試管中（S2~S7）將S1校準品依次倍比稀釋6個梯度至S7，共配制7個濃度的校準品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下圖所示，“1×通用稀釋液"作為零濃度校準品S0，共8支校準品。
· 
6. 樣品采集、預處理及儲存
· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應及時進行檢測，如不能及時進行檢測，應等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，樣品凍融不超過2次。
· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應及時進行檢測，如不能及時進行檢測，應等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，樣品凍融不超過2次。
· 組織：組織稱重后剪碎，將剪碎的組織加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量體積比，比如100mg的組織樣品對應400uL的裂解液，具體可根據(jù)實驗需要適當調整，最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
· 細胞：取適量細胞，于冰上進行超聲破碎，5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
· 細胞上清：取細胞上清于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
7. 實驗步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標板未恢復室溫前，請勿開封。
1 | 每孔加入校準品/待測樣品50μL，之后每孔再加入一抗抗體工作液50uL。 |
2 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。 |
3 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
4 | 每孔加入100μL酶標二抗。 |
5 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。 |
6 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
7 | 每孔加入100μL顯色液 |
8 | 37℃下避光孵育15分鐘。 |
9 | 每孔加入50μL終止液。 |
10 | 使用酶標儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進行檢測。如果最高濃度校準品OD值過高，應立即在405/630nm雙波長條件下檢測。 |
8. 結果計算
建議使用四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合：以濃度值為橫坐標，吸光度值為縱坐標；
建議使用專業(yè)化軟件進行結果擬合和計算，如ELISA CALC、SPSS、Graphpad Prism等。示例數(shù)據(jù)
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。
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9. 檢測的局限性
樣本濃度超出檢測范圍上，應當進行適當加大稀釋倍數(shù)后再次檢測，計算結果應當乘上稀釋倍數(shù)。樣本濃度低于LOQ定量，檢測結果無法進行準確定量。
10. 產(chǎn)品性能指標
以下結果基于校準品的濃度值實驗得出，未納入基質效應等其他因素的潛在影響。
靈敏度：0.38ng/mL。
精密度：板內精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關因子在稀釋緩沖液中制備為10μg/mL測定，沒有觀察到明顯的交叉反應。?
T4 ELISA檢測試劑盒 （酶聯(lián)免疫法）競爭法原理
T4 ELISA檢測試劑盒 （酶聯(lián)免疫法）競爭法原理
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