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小鼠免疫球蛋白ELISA檢測試劑盒操作步驟

更新時間：2021-07-26

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小鼠免疫球蛋白ELISA檢測試劑盒操作步驟
樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過一夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

有以下操作技巧：

A、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

B、合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

C、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

D、要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

E、樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

小鼠免疫球蛋白ELISA檢測試劑盒操作步驟
儲存條件和試劑盒準(zhǔn)備：

1）有效期內(nèi)的試劑如開封后未用完，請2-8°C 保存。

2）過期的試劑請不要用，打開后的試劑2-8°C 保存。

3）酶標(biāo)包被板必須2-8°C 保存，如有未用完的酶標(biāo)包被板，打開的鋁箔袋須密封并2-8°C 保存。

4）試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。