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小鼠ATP酶免檢測，三磷酸腺苷ELISA含量檢測方法

更新時間：2019-07-08

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ATP酶免檢測，三磷酸腺苷ELISA含量檢測方法

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應分別小于10%和15% 。

檢測范圍：

200 nmol/L - 6400 nmol/L

靈敏度：

低檢測濃度小于10 nmol/L

操作步驟

標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠三磷酸腺苷（ATP）水平。用純化的小鼠三磷酸腺苷（ATP）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入小鼠三磷酸腺苷（ATP），再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠三磷酸腺苷（ATP）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠三磷酸腺苷（ATP）含量。

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