大鼠胰島素（INS）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)定量試劑盒
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)物上清及相關(guān)液體樣本中胰島素（INS）的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素（INS）水平。用純化的大鼠胰島素（INS）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入大鼠胰島素（INS），再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠胰島素（INS）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠胰島素（INS）含量。
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：標準品濃度依次為：48、24、12、6、3、0 mU/L.
操作步驟
- 標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
- 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
- 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
- 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
注意事項：
- 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
- 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
- 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
- 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
- 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
- 底物請避光保存。
- 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
- 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
- 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋
倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應分別小于10%和15% 。
檢測范圍：
1.5 mU/L - 48 mU/L
靈敏度：
zui低檢測濃度小于0.1 mU/L
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存： 2-8℃。
2．有效期： 6個月
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更新時間：2018-06-04 
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